實(shí)時(shí)定量PCR儀通過(guò)熒光化學(xué)物質(zhì)(如熒光染料或熒光探針)標(biāo)記DNA產(chǎn)物,在PCR指數(shù)擴(kuò)增期實(shí)時(shí)捕獲熒光信號(hào)強(qiáng)度變化。系統(tǒng)自動(dòng)采集每個(gè)循環(huán)的熒光增量數(shù)據(jù),經(jīng)配套軟件進(jìn)行基線校正和閾值設(shè)定后,利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或ΔΔCt法計(jì)算初始模板濃度。這一技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,且整個(gè)PCR過(guò)程可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,耗時(shí)短,操作方便,不易污染。
實(shí)時(shí)定量PCR儀選型建議:
在選擇實(shí)時(shí)定量PCR儀時(shí),需綜合考慮以下因素:
實(shí)驗(yàn)需求:明確待檢測(cè)的靶標(biāo)分子類型、檢測(cè)靈敏度要求及平臺(tái)適用范圍。例如,基因表達(dá)分析可選擇4通道系統(tǒng),而病毒載量檢測(cè)則建議選配ROX校正染料通道。
性能指標(biāo):關(guān)注溫控系統(tǒng)的精度、靈敏度、擴(kuò)增速度及均勻性。性能越好的PCR儀,實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性越高。
品牌和售后服務(wù):選擇品牌的產(chǎn)品,確保產(chǎn)品質(zhì)量和售后服務(wù)可靠。同時(shí),考慮品牌產(chǎn)品的應(yīng)用范圍和配件選擇。
預(yù)算:根據(jù)預(yù)算選擇適合的儀器。在預(yù)算有限的情況下,可選擇性能穩(wěn)定、性價(jià)比較高的PCR儀。